反相HPLC色谱柱的推荐再生步骤
1.取下色谱柱，然后重新连接到色谱仪上，让液体/气体反方向流过色谱柱。
2.用HPLC级水冲洗掉盐/缓冲液。以1毫升/分钟的速度把25毫升水泵入色谱柱。
3.用25毫升异丙醇冲洗色谱柱。
4.用25毫升二氯甲烷冲洗色谱柱。
5.用25毫升正己烷冲洗色谱柱。
6.再次用25毫升二氯甲烷冲洗色谱柱。
7.用25毫升异丙醇冲洗色谱柱。
8.按正确的流动方向，把色谱柱重新连接到色谱上。用不含缓冲液的流动相冲洗色谱柱，然后重新倒入缓冲液。
9.用25到50毫升流动相平衡色谱柱。
10.注入标准物或样品，检查性能是否恢复。
色谱柱的保养
在正常情况下，色谱柱至少可以使用3—6个月，能完成数百次以上的分离。但是，若操作不慎，将使色谱柱很易损坏而不能使用。因此为了保持柱效、柱容量及渗透性，必须对色谱柱进行仔细地保养。
1．色谱柱极易被微小的颗粒杂质培塞，使操作压力速升高而无法使用，因此必须将流动相仔细地蒸馏或用0.45μm孔径的滤膜过滤。在流动相组贮槽与色谱柱间，安装0.45μm孔径的过滤器。在柱子上端接头处装上多孔过滤片，以防止固体颗粒进入色谱柱中。在水溶液流动相中，细菌容易生长，可能堵塞筛板加入0.01％NoHa能防止能防止细菌生长。
2．最好使用进祥阀进样，以防止注射器进样时、注射隔膜碎屑堵塞柱子入口。
3．对硅胶基键合相填科，水溶液流动相的PH值不得超出2—8．5的范围，使温度不宜过高。柱子在酸性或碱性条件下使用之后，。应依次用水、甲醇清洗，对暂时不用而需要较长时间保存的柱子，要用纯甲清洗，柱子两端用金属螺帽封闭，保存于干净的有机溶剂中。
4．要防止色谱柱被振动或撞击，否则柱内填料床层产生裂缝和空隙，会使色谱峰出现“驼峰”或“对峰”。
5．要防止流动相逆向流动，否则将使固定相层位移，柱效下降。
6．使用保护柱。连续注射含有未被洗脱样品时，会使柱效下降，保留值改变。为了延长柱寿命，在进样阀和分析柱间加上保护柱，其长度一般为3—5cm，填充与分析柱性质相似的表面多孔型固定相，因此可干法填装。而且价廉、更换容易。实验表明，使用保护柱后，除了使扩为零的组分的塔板数减少外，其柱效下降很少。
色谱柱的再生
一般情况下，硅胶和ODS等化学键合固定相再生是困难的。有时，采用下述方法可能提高校效。
1．由于杂质微粒等因素，使柱上端固定相变色，柱效下降。这时，可仔细地将变色部分除去（约3mm左右），再补充新的固定香。
2．当色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，可选择合适的溶剂进行洗净。
3．对离子交换树脂柱，先经1mol／LHCI相1molNaOH溶液洗净，再以1—2mol/LNaCl水溶液平衡，以超声波发生器进行清洗，通常可获良好的效果。
4．当采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再生。
在高效液相色谱使用过程中故障排出时要遵守以下原则：一次只改变一个因素，从而确定假定因素与问题之间的联系；如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位，从而避免浪费；养成良好的记录习惯，一个良好的记录是成功地进行故障排除的关键。
总之，在使用高效液相色谱时一定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养，仪器系统的干净是用好仪器和维护维修仪器的关键。
