近期，可口可乐公司在橙汁中发现未经许可的杀菌剂，并向美国食品与药物管理局(FDA)报告。此次检出杀菌剂多菌灵的橙汁，原料橙来自巴西，当地多菌灵多用于杀灭霉菌，但实验时发现，该物质有导致动物肝癌病变的高风险。这一事件引发了外界对中国橙汁饮料食品安全的担忧。中国是巴西橙汁第四大进口国，据悉，中国市场现售的熟知品牌橙汁，不同程度地兑入了巴西橙汁。
目前，国内对于果汁中多菌灵的检测主要依据SN/T 1753-2006《进出口浓缩果汁中噻菌灵、多菌灵残留检测方法高效液相色谱法》，赛分科技日前建立了采用QuEChERS和LC/MS/MS检测橙汁中多菌灵的方法，不仅操作上更加快速简单，而且大大提高了目标物质的检出限（多菌灵检测限达到ppb级）。
采用QuEChERS和LC/MS/MS方法检测橙汁中的多菌灵
产品描述
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ECQUEU750CT-MP |
50 mL离心管，每袋包含4 g MgSO4，1g NaCl，500 mg 柠檬酸二钠和1 g 柠檬酸三钠 |
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CUMPSC18CT |
2mL微离心管装有150 mg无水硫酸镁、50 mg PSA、50 mg封尾C18 |
一、样品前处理
1. 向50mL离心管中加入10 mL橙汁，涡流混均、平衡15 min。
2．加入10 mL乙腈混合。加入盐包 (ECQUEU750CT-MP)，剧烈振荡1min，然后在20 ºC，5000 rpm转速下离心5 min。下面是经过QuEChERS提取后的样品图片，上层是乙腈提取液。
3．移取1 mL提取液至装有150 mg无水硫酸镁、50 mg PSA、50 mg封尾C18的2 mL微离心管中（CUMPSC18CT）
4. 振摇1 min后在10000 rpm转速下离心5 min。移取 0.5 mL提取液至2 mL自动进样瓶。加入25 μL 1 ppm 三苯基磷酸酯（TPP），然后进行LC/MS/MS分析。
二、液相色谱-串联质谱条件
色谱柱: Sepax HP-C18, 2.1 x 100 mm, 3 μm, 120 Å
柱温: 室温
进样体积: 10 μL (15 ºC)
流动相: A: 0.1% 甲酸溶液；B:含 0.1% 甲酸的甲醇溶液
流速: 200 μL/min
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流动相梯度程序 | ||
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时间(min) |
%A |
%B |
|
0 |
50 |
50 |
|
3 |
0 |
100 |
|
8 |
0 |
100 |
|
9 |
50 |
50 |
|
14 |
50 |
0 |
电离模式: 电喷雾离子源（ESI）
离子极化方式：正离子 ESI
电喷雾电压: 3000 V
雾化气压力 (N2): 40 psi
辅助气(N2)压力: 10 psi
离子传输毛细管温度: 350 °C
扫描方式: 选择反应监测（SRM, 0-10 min)
碰撞诱导裂解（CID）条件: 1.5 mTorr 氩气
SRM模式下监测的跃迁过程如下：
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化合物 |
母离子 |
子离子1 |
碰撞能量(CE) |
子离子2 |
碰撞能量(CE) |
S-Lens |
驻留时间（s） |
|
多菌灵 |
92.093 |
132.080 |
29 |
160.080 |
17 |
81 |
0.2 |
|
TPP（内标） |
327.093 |
77.020 |
37 |
152.070 |
33 |
98 |
0.10 |
三、数据分析及实验结果
多菌灵的基质匹配校准曲线：
线性范围是2-500 ng/mL，R2 =0.9992。检出限（LOD）和定量限(LOQ)分别是0.4 和1.4 ng/mL。
多菌灵的准确度和精密度数据
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加标浓度（ng/mL） |
回收率（%） |
RSD%(n=4) |
|
10 |
96.6 |
4.5 |
|
50 |
100.2 |
3.4 |
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250 |
103.7 |
2.1 |
按照优化的方法，对三家知名品牌的橙汁进行了检测，结果见下表：
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样品 |
样品描述 |
检测到的多菌灵含量 |
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样品1 |
100% 鲜橙汁-品牌A |
< 1.4 ng/mL |
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样品2 |
橙汁-品牌B |
< 1.4 ng/mL |
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样品3 |
含果粒的橙汁-品牌B |
5.3 ng/mL |
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样品4 |
纯果乐（低酸）-品牌C |
< 1.4 ng/mL |
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样品5 |
橙汁-品牌B |
< 1.4 ng/mL |
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样品6 |
纯果乐（含一些果粒）-品牌C |
< 1.4 ng/mL |
这六种橙汁样品每种平行测定3次。仅在样品3（含果粒的橙汁-品牌B）中检出多菌灵，含量为5.3 ng/mL，远远低于欧盟规定的最大允许量 200 ppb。图1为空白样品3（a）和加标样品3 (50 ng/mL)中多菌灵的色谱图。
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